Cómo reiniciar una columna C18

Regenera tu columna C18 de fase inversa de HPLC.
Por sean lancaster

Paso 1

Desconecta la columna C18 de la corriente de flujo y reemplaza la columna en la dirección inversa. La ejecución de la parte posterior de disolvente a través de la columna en la dirección opuesta aflojará el efecto de embalaje que se produce con el tiempo. Se debe tener cuidado de no perder una gran cantidad de material de embalaje del final de la columna. Algunos fabricantes utilizan una malla más grande en el extremo aguas arriba de la columna, de modo que cuando la dirección del flujo se invierta la malla más grande esté en la posición de aguas abajo. Este método de regeneración se denomina lavado a contracorriente. Para protegerse contra el material de embalaje que fluye hacia el detector del sistema y de causar posiblemente un tapón, permite que el sistema funcione sin el detector conectado y dirija el flujo de salida de la columna a los residuos.


Paso 2

Coloca el tubo de entrada de disolvente en una serie de disolventes para provocar la elución de los compuestos retenidos con la columna en la dirección inversa. La serie de disolventes usados ​​varían en sus características hidrófilas. Mediante la variación de los disolventes eluirás compuestos de naturaleza hidrófila igualmente variada. Utiliza 50 ml de cada uno de los siguientes disolventes sucesivamente: agua (si estás utilizando un tampón en tu disolvente), metanol, isopropanol, diclorometano, hexano, diclorometano e isopropanol.


Paso 3

Vuelve a conectar la columna en la orientación correcta y ejecuta el disolvente a través del sistema. Usa por lo menos 75 ml de disolvente para lavar la columna antes de proceder. Ejecuta una prueba de inyección de un estándar que ejecutaste cuando la columna era nueva y comprueba los resultados. Presta especial atención a las horas de máxima retención, colas de picos y el tiempo total de análisis. El grado en que estos atributos coincidan con la ejecución inicial de la columna cuando era nueva indicará el grado en que ha sido regenerada la columna. Si los resultados no son satisfactorios, reemplaza la columna con una nueva y tira la columna vieja en la basura.